實(shí)驗(yàn)中心

兒童血管瘤專(zhuān)科醫(yī)院，在我們國(guó)家應(yīng)該是上海第九人民醫(yī)院整形外科血管瘤專(zhuān)科比較好了，那里的病人很多，病例也很多，醫(yī)生的技術(shù)以及服務(wù)態(tài)度都還不錯(cuò)，就是病人多了，交談的時(shí)間少，這是唯一缺點(diǎn)。專(zhuān)科時(shí)間：每周三上午專(zhuān)家：林曉曦主任醫(yī)生

溫州醫(yī)學(xué)院附屬第一醫(yī)院 實(shí)驗(yàn)診斷中心潘欽石1． 腸桿菌的鑒定流程⑴．根據(jù)苯丙氨酸脫羧酶實(shí)驗(yàn)： （＋）：變形桿菌屬，普羅威登斯菌屬，摩根氏菌屬 （－）：埃希氏菌屬，志賀氏菌屬，沙門(mén)氏菌屬，枸櫞酸桿菌屬，愛(ài)德華菌屬；克雷伯菌屬，腸桿菌屬，沙雷氏菌屬，哈夫尼亞菌屬。⑵．苯丙氨酸脫羧酶實(shí)驗(yàn)陰性，加做葡萄糖酸鹽實(shí)驗(yàn)（＋）：克雷伯菌屬，腸桿菌屬，沙雷氏菌屬，哈夫尼亞菌屬a． 動(dòng)力（－）：克雷伯菌屬，屬內(nèi)種的鑒定主要根據(jù)吲哚試驗(yàn)（肺克吲哚實(shí)驗(yàn)陰性，三個(gè)亞種鑒別試驗(yàn)IMViC：肺炎－－＋＋，臭鼻－＋－d，鼻硬結(jié)－＋－－）b． 動(dòng)力（＋），DNA酶（＋）：沙雷氏菌屬動(dòng)力（＋），DNA酶（－），枸櫞酸鹽（＋）：腸桿菌屬（主要是陰溝腸桿菌和產(chǎn)氣腸桿菌，前者賴(lài)氨酸陰性，而后中為陽(yáng)性）動(dòng)力（＋），DNA酶（－），枸櫞酸鹽（－）：哈夫尼亞菌屬（－）：加做IMViC（靛基質(zhì)-甲基紅-VP-枸櫞酸鹽）試驗(yàn)a． IMViC（＋＋－－）：大腸埃希菌（H2S－）或愛(ài)德華菌屬（H2S＋）。b． IMViC（－／＋＋－＋）：枸櫞酸桿菌屬⑶．苯丙氨酸脫羧酶實(shí)驗(yàn)陽(yáng)性，根據(jù)產(chǎn)H2S可分（＋）：變形桿菌屬 屬內(nèi)主要鑒定試驗(yàn)如下 普變 奇變 產(chǎn)粘變 潘尼氏 尿素酶 ＋ ＋ ＋ ＋ 鳥(niǎo)氨酸 － ＋ － － 靛基質(zhì) ＋ － － － 麥芽糖 － － ＋ ＋ 木 糖 ＋ ＋ － ＋ （－）：普羅威登氏菌屬，摩根氏菌屬 普羅威登氏菌屬：鳥(niǎo)氨酸：－；枸櫞酸鹽：＋（屬內(nèi)鑒定尿素酶及一些碳水化合物的產(chǎn)酸試驗(yàn)，如甘露醇﹑阿拉伯糖﹑海藻糖等） 摩根氏菌屬：鳥(niǎo)氨酸：＋；枸櫞酸鹽：－（只有一個(gè)種：摩氏摩根氏菌）⑷．志賀氏菌屬和沙門(mén)氏菌屬這兩種菌屬在腸道選擇性培養(yǎng)基（SS、麥康凱）形成不發(fā)酵乳糖的透明或半透明的無(wú)色菌落，但一些沙門(mén)氏能產(chǎn)H2S就會(huì)形成中心黑色的菌落，鑒定時(shí)在選擇性培養(yǎng)基上挑選可疑菌落進(jìn)行鑒定。a．志賀氏菌屬 主要系統(tǒng)生化：KIA：K/A（只有福氏6型能產(chǎn)氣），H2S（－）；MIU：－+/-－； 苯丙：－；枸櫞酸鹽：－。 報(bào)告結(jié)果時(shí)要根據(jù)其血清學(xué)的結(jié)果鑒定到種，即A群（痢疾志賀氏菌）﹑B群（福氏志賀氏菌）﹑C群（鮑氏志賀氏菌）﹑D群（宋氏志賀氏菌）；我國(guó)主要以B群和D群為主。b．沙門(mén)氏菌屬 主要系統(tǒng)生化：KIA：K/AG，H2S（+/－）；MIU：＋－－；苯丙：－；枸櫞酸鹽：－。 傷寒沙門(mén)氏菌的抗原結(jié)構(gòu)：菌體抗原（O抗原），鞭毛抗原（H抗原），包膜抗原（主要是Vi抗原）根據(jù)系統(tǒng)生化鑒定到沙門(mén)氏菌屬后，在根據(jù)其抗原結(jié)構(gòu)的特點(diǎn)，用血清學(xué)凝集分到種即可報(bào)告結(jié)果。血清凝集步驟如下：A-F多價(jià)O（＋）： O2，Ha（＋）：A群（甲型副傷寒沙門(mén)氏菌） O4，Hb（＋）：B群（乙型副傷寒沙門(mén)氏菌） O6﹑7，Hc，Vi（＋）：C群（丙型副傷寒沙門(mén)氏菌） O9，Hd，Vi（＋）：D群（傷寒沙門(mén)氏菌） O3﹑10，Heh（＋）：E群 O11，Hi（＋）：F群A-F多價(jià)O（－），做Vi血清因子凝集：（＋）濃菌液沸水煮沸30min，再用A-F多價(jià)O血清定群；（－）繼續(xù)以A-F以外的多價(jià)O血清凝集分型。血清凝集注意：確定O群后， 一定要用H因子再做凝集；最終結(jié)果要以凝到H相后才能報(bào)告。七．非發(fā)酵革蘭陰性桿菌非發(fā)酵革蘭陰性桿菌是指一群不利用葡萄糖或僅以氧化形式利用葡萄糖﹑需氧或兼性厭氧﹑無(wú)芽胞的革蘭陰性桿菌。氧化酶試驗(yàn)一般陽(yáng)性，除不動(dòng)桿菌屬和嗜麥芽假單胞菌外。非發(fā)酵菌按下列試驗(yàn)進(jìn)行初步分屬 菌屬 氧化酶 O-F試驗(yàn) 動(dòng)力 MaCC生長(zhǎng)情況 觸酶 假單胞菌屬 ＋ O/－ ＋/－ 生長(zhǎng) ＋ 無(wú)色桿菌屬 ＋ O/－ ＋/－ 生長(zhǎng) ＋ 不動(dòng)桿菌屬 － O/－ － 生長(zhǎng) ＋ 產(chǎn)堿桿菌屬 ＋ － ＋ 生長(zhǎng) ＋ 摩拉菌屬 ＋ － － 不生長(zhǎng) ＋ 金氏菌屬 ＋ F（弱） － 不定 － 黃桿菌屬 ＋ F（弱） － 不生長(zhǎng) ＋ 下面主要講一下銅綠假單胞菌：在血平板上形成的菌落大而扁平﹑濕潤(rùn)﹑有金屬光澤，有生姜味的灰綠色或蘭綠色的菌落，并有明顯的溶血環(huán)。常有色素產(chǎn)生（綠膿素，青膿素，紅膿素，黑膿素等），在MH平板上更加明顯。銅綠假單胞菌的最低鑒定標(biāo)準(zhǔn)：①動(dòng)力＋②氧化酶＋③枸櫞酸鹽＋④氧化分解GLU，木糖⑤不利用麥芽糖⑥賴(lài)﹑鳥(niǎo)氨酸脫羧酶試驗(yàn)－⑦精氨酸雙水解酶試驗(yàn)＋⑧H2S－。 八．棒狀桿菌屬 棒狀桿菌屬是一群革蘭陽(yáng)性桿菌。菌體大小長(zhǎng)短不一，常一端或兩端膨大呈棍棒狀。 大多數(shù)存在于水和土壤中，其中有的是人和動(dòng)物粘膜上的正常菌群，若是從無(wú)菌部位分離到棒狀桿菌，應(yīng)予以鑒定（如宮頸拭子）。 在血平板上能生長(zhǎng)，但生長(zhǎng)不良好，菌落細(xì)小，濕潤(rùn)。 鑒定：根據(jù)觸酶和有無(wú)溶血，可分： ⑴．H2O2＋，無(wú)溶血：白喉﹑假白喉﹑潰瘍﹑干燥﹑假結(jié)核﹑馬棒﹑牛棒 ⑵．H2O2－，有溶血：溶血棒﹑化膿棒﹑陰道棒 ⑶．加做葡萄糖，麥芽糖，蔗糖產(chǎn)酸試驗(yàn)，結(jié)合⑴⑵和標(biāo)本類(lèi)型，基本上可以鑒定到是哪一種棒狀桿菌。以上文章是本人工作中的一些總結(jié)，供大家參考，若有錯(cuò)誤，請(qǐng)大家批評(píng)指正??！

溫州醫(yī)學(xué)院附屬第一醫(yī)院 實(shí)驗(yàn)診斷中心 潘欽石五．奈瑟氏菌屬和布蘭漢菌屬奈瑟氏菌屬主要有腦膜炎奈瑟氏菌和淋病奈瑟氏菌；布蘭漢氏菌屬只有卡他布蘭漢氏菌。兩者系需氧革蘭陰性球菌。⑴ 奈瑟氏菌的生物學(xué)特性：革蘭陰性球菌，需氧，卵圓形或腎形，無(wú)動(dòng)力，氧化酶及觸酶均陽(yáng)性。培養(yǎng)時(shí)對(duì)營(yíng)養(yǎng)要求高，能在巧克力平板或有豐富營(yíng)養(yǎng)的血平板上，在5～10%CO2環(huán)境中生長(zhǎng)。⑵．鑒定過(guò)程：a． DNA酶實(shí)驗(yàn)陽(yáng)性為布蘭漢氏菌，陰性則為奈瑟氏菌。b． 能在普通血平板上生長(zhǎng)的為其他奈瑟氏菌，在巧克力平板上生長(zhǎng)的主要為腦膜炎奈瑟氏菌和淋病奈瑟氏菌。c． 能使麥芽糖氧化分解產(chǎn)酸的是腦膜炎奈瑟氏菌，不利用麥芽糖的是淋病奈瑟氏菌。 ⑶．幾種主要細(xì)菌對(duì)葡萄糖﹑麥芽糖﹑蔗糖的氧化分解產(chǎn)酸結(jié)果如下： 氧化分解產(chǎn)酸 菌種 葡萄糖 麥芽糖 蔗糖 淋病奈瑟氏菌 ＋ － － 腦膜炎奈瑟氏菌 ＋ ＋ － 粘液奈瑟氏菌 ＋ ＋ ＋ 卡他布蘭漢菌 － － － ⑷ DNA酶實(shí)驗(yàn)：a． 方法：將待鑒定細(xì)菌點(diǎn)種于含0.2%DNA的DNA瓊脂平板上，培養(yǎng)后用1mmol/LHCl覆蓋平板，菌落周?chē)霈F(xiàn)透明環(huán)者為陽(yáng)性。b． 原理：某些細(xì)菌能產(chǎn)生DNA酶，可使DNA長(zhǎng)鏈水解成由幾個(gè)單核苷酸組成的寡核苷酸鏈；長(zhǎng)鏈DNA可被酸沉淀，而水解后形成后的寡核苷酸鏈則可溶于酸，故在DNA瓊脂平板加鹽酸，可在菌落周?chē)纬赏该鞯娜苎h(huán)。（腸桿菌科中只有沙雷氏菌和變形桿菌可產(chǎn)生DNA酶，陽(yáng)性球菌中只有金葡菌能產(chǎn)生DNA酶。） 六．腸桿菌科腸桿菌科是一大群生物學(xué)性狀相似的革蘭陰性桿菌，其中對(duì)人致病性較強(qiáng)的鼠疫耶爾森菌（現(xiàn)已基本沒(méi)有流行）和傷寒沙門(mén)菌；4類(lèi)常引起腹瀉和腸道感染的細(xì)菌（埃希氏菌﹑志賀氏菌﹑沙門(mén)氏菌﹑耶爾森氏菌）和8種常導(dǎo)致院內(nèi)感染的細(xì)菌（枸櫞酸桿菌屬﹑克雷伯菌屬﹑腸桿菌屬﹑多源菌屬﹑沙雷菌屬﹑變形桿菌屬﹑普羅威登菌屬和摩根菌屬）。另外還有很多細(xì)菌是腸道的正常菌群，但在一定條件下也可致?。l件致病菌）。實(shí)驗(yàn)過(guò)程中對(duì)于革蘭陰性桿菌首先要做氧化酶實(shí)驗(yàn)，陰性為腸桿菌科細(xì)菌；陽(yáng)性的為非發(fā)酵菌（我們實(shí)驗(yàn)室還沒(méi)有簡(jiǎn)單的系統(tǒng)鑒定方法，一般要儀器上卡檢測(cè)）或弧菌科細(xì)菌。1． 腸桿菌科的系統(tǒng)生化⑴．KIA試驗(yàn)（克氏雙糖鐵）組成：乳糖／葡萄糖=10／1（斜面／高層，其長(zhǎng)度最好是都是2CM）結(jié)果判斷：斜面或高層變黃色：陽(yáng)性；不變色（紅色）：陰性 高層中出現(xiàn)裂隙：產(chǎn)氣陽(yáng)性 高層中出現(xiàn)黑色（FeS）：產(chǎn)H2S陽(yáng)性⑵．苯丙氨酸脫羧酶試驗(yàn)細(xì)菌產(chǎn)生的苯丙氨酸脫羧酶使苯丙氨酸氧化脫羧后生成苯丙酮酸，再與10%的FeCl3試劑產(chǎn)成深綠色反應(yīng)。（變形桿菌屬﹑普羅威登菌屬和摩根菌屬為陽(yáng)性，其他為陰性）⑶．枸櫞酸鹽試驗(yàn)（碳源利用實(shí)驗(yàn)）在枸櫞酸鹽培養(yǎng)基中細(xì)菌能利用的碳源只有枸櫞酸鹽，分解后生成碳酸鈉，使培養(yǎng)基變堿性，pH指示劑溴麝香草酚藍(lán)由淡綠色變?yōu)樯钐m色，即為枸櫞酸鹽試驗(yàn)陽(yáng)性。（埃希氏菌屬，志賀氏菌屬，愛(ài)德華菌屬為陰性，其他為陽(yáng)性）注意：接種時(shí)不能被糖，蛋白胨污染，要單獨(dú)接種）⑷．甲基紅（MR）試驗(yàn)細(xì)菌分解葡萄糖產(chǎn)生丙酮酸，丙酮酸進(jìn)一步分解為甲酸、乙酸、乳酸和琥珀酸等，使培養(yǎng)基的pH下降至4.5以下時(shí)，加入甲基紅指示劑由桔黃色變桔紅色為弱陽(yáng)性；變紅色為陽(yáng)性。培養(yǎng)基成分：葡萄糖蛋白胨水試劑：甲基紅0.1g，酒精300ml，水200ml主要用于大腸埃希菌（＋）和產(chǎn)氣腸桿菌（－）的鑒別；常與V-P實(shí)驗(yàn)聯(lián)合使用，一般情況下兩者結(jié)果正好相反，但也有例外如奇變兩者同為陽(yáng)性。⑸．MIU（動(dòng)力－靛基質(zhì)－尿素）試驗(yàn)①．動(dòng)力：在半固體培養(yǎng)基中穿刺接種細(xì)菌培養(yǎng)后，若穿刺線周?chē)屑?xì)菌擴(kuò)散生長(zhǎng)，則為動(dòng)力（＋）；清晰則為動(dòng)力（－）。②．靛基質(zhì)試驗(yàn)（吲哚試驗(yàn)）：某些細(xì)菌有色氨酸酶，能分解培養(yǎng)基中的色氨酸生成吲哚。吲哚再與試劑對(duì)位二氨基苯甲醛作用形成玫瑰吲哚而呈紅色。③．尿素試驗(yàn)：某些細(xì)菌能產(chǎn)生尿素酶，分解尿素產(chǎn)生大量的氨，使培養(yǎng)基變堿，再使培養(yǎng)基中的指示劑（0.4%酚紅）變紅色即為陽(yáng)性。 ⑹．硝酸鹽還原試驗(yàn)NO3ˉNO2ˉ（大腸）NO3ˉNH4＋NO3ˉN2（沙雷氏菌屬）試劑甲：對(duì)氨基苯磺酸試劑乙：-萘胺觀察結(jié)果時(shí)甲液和乙液要等量加入，立即或10min內(nèi)出現(xiàn)紅色為陽(yáng)性。若不變色，則要加入鋅粉：①變紅色，說(shuō)明硝還試驗(yàn)為真陰性②仍不變色，說(shuō)明硝還試驗(yàn)真陽(yáng)性，但原先還原產(chǎn)物不是NO2ˉ。陰性結(jié)果出現(xiàn)時(shí)有三種可能：①細(xì)菌不能還原硝酸鹽②亞硝酸鹽繼續(xù)分解生成氨或氮③培養(yǎng)基不適合細(xì)菌生長(zhǎng)腸桿菌科細(xì)菌均能還原硝酸鹽為亞硝酸鹽。 ⑺．氨基酸脫羧試驗(yàn) 細(xì)菌產(chǎn)生脫羧酶分解氨基酸使其脫羧生成胺和CO2，雖然各種細(xì)菌所產(chǎn)生的脫羧酶不一定相同，但最后都能生成胺（賴(lài)氨酸尸胺，鳥(niǎo)氨酸腐胺，精氨酸精胺）和CO2。然后胺能使培養(yǎng)基變堿性，通過(guò)指示劑（溴甲酚紫）由黃變紫即為陽(yáng)性。對(duì)照管（無(wú)氨基酸）為黃色。 注意：①微量管接種好后要加石蠟，使培養(yǎng)基造成厭氧環(huán)境。（生成的胺更穩(wěn)定，還能誘導(dǎo)氨基酸脫羧酶的產(chǎn)生） ②對(duì)照管如果不顯黃色，則結(jié)果不能判斷。 應(yīng)用：除傷寒沙門(mén)氏菌，雞沙門(mén)氏菌外，其他沙門(mén)氏菌鳥(niǎo)AA，賴(lài)AA均為陽(yáng)性；除宋氏和鮑氏志賀菌外其他志賀菌也菌為陽(yáng)性。 ⑻．葡萄糖酸鹽試驗(yàn) 微量管在培養(yǎng)18～24h后，加班氏試劑，水浴煮沸10min，由蘭色變黃綠色到磚紅色即為陽(yáng)性，不變?yōu)殛幮浴?