泌尿外科

早泄診斷工具( premature ejaculation diagnostic tool，PEDT) 是一份含有五項問題的問卷，用以評價射精相關的控制力、頻率、最小刺激、苦惱和人際交往困難，在國際上得到廣泛應用。 請對您性交時的射精情況進行評價，以下五個問題請選擇您覺得最符合您的情況，每項得分匯總后，即為最終得分。A(0分)，B(1分)，C(2分)，D(3分)，E(4分)。1.性生活時您延遲射精的困難程度如何? A.沒有困難 B.有點困難 C.中等困難 D.非常困難 E.完全無法延遲2.先于您本人意愿射精的可能性為? A.（幾乎）沒有（0%） B.不經(jīng)常（25%） C.近半情況下（50%） D.多數(shù)情況下（75%） E.總是/幾乎一直（100%）3.是否受到很小的刺激就會射精？ A.完全不 （0%） B.不經(jīng)常（25%） C.近半情況下（50%） D.多數(shù)情況下（75%） E.總是/幾乎一直（100%）4.您是否因射精太早而困擾？ A.完全沒有 B.有點困擾 C.一般 D.很困擾 E.非常困擾5.是否關心您的射精時間可能讓配偶不滿？ A.完全沒有 B.有點關心 C.一般 D.很關心 E.非常關心如您評分≥11分提示存在早泄，9分或10分考慮可能存在早泄，≤8分無早泄存在。

國際勃起功能問卷（IIEF-5）簡易自測請根據(jù)過去3個月內(nèi)的情況評估012345得分1.對陰莖勃起及維持勃起有多少信心很低低中等高很高2.受到性刺激后，有多少次陰莖能堅挺地進入陰道無性生活幾乎沒有或完全沒有只有幾次有時或大約一半時候大多數(shù)時候幾乎每次或每次3.性交時，有多少次能在進入陰道后維持陰莖勃起沒有嘗試性交幾乎沒有或完全沒有只有幾次有時或大約一半時候大多數(shù)時候幾乎每次或每次4.性交時，保持勃起至性交完畢有多大困難沒有嘗試性交非常困難很困難有困難有點困難不困難5.嘗試性交時是否感到滿足沒有嘗試性交幾乎沒有或完全沒有只有幾次有時或大約一半時候大多數(shù)時候幾乎每次或每次勃起功能國際問卷-5（IIEF-5）積分評價積分評價積分評價5分～7分重度ED12分～21分輕度ED8分～11分中度ED≥22分無ED按陰莖勃起硬度分級：Ⅰ級，陰莖只脹大但不硬為重度ED；Ⅱ級，硬度不足以插入陰道為中度ED；Ⅲ級，能插入陰道但不堅挺為輕度ED；Ⅳ級，陰莖勃起堅挺為勃起功能正常。出自---------------------------《2013版中華男科學會陰莖勃起功能障礙診斷與治療指南》

熱休克蛋白在男性不育中的研究進展------《中華男科學雜志》2013年05期何犇 綜述；李強，卓暉 審校（重慶醫(yī)科大學附屬成都第二臨床學院·成都市第三人民醫(yī)院泌尿外科，成都，610031）【摘要】熱休克蛋白是一類生物進化上高度保守的伴侶蛋白分子，具有多種生物學功能，包括作為分子伴侶，細胞保護，抗凋亡和免疫調(diào)節(jié)等。近年來研究發(fā)現(xiàn)，多種熱休克蛋白參與精子發(fā)生、精子獲能及受精等一系列活動，與男性生殖過程密切相關。因此，進一步研究熱休克蛋白在男性不育中的具體機制及作用，可能為男性不育提供新的治療途徑。本文重點對熱休克蛋白在男性不育中的研究進展作一綜述?！娟P鍵詞】熱休克蛋白；男性不育；精子【中圖分類號】R698+.2 【文獻標志碼】Aresearch advance of heat shock protein in male infertilityhe ben, li qiang, zhuo hui(Department of Urology, the second affiliated Hospital of chengdu Chongqing Medical Universitythe third peoples Hospital of chengdu, chengdu, 610031 China)【ABSTRACT】Heat shock protein(HSP) is a group of evolutionarily highly conserved cell chaperone protein, which is involved in the processes of molecular chaperone, cytoprotection, anti-apoptosis and immunoregulation. In recent years, several studies have found that HSP is involved in the processes of spermatogenesis, sperm capacitation and fertilization which play a significant role in male reproduction. therefore, further studies on the mechanism of HSP in the infertility may provide a new way for the management of male infertility. Thus, we review recent advances of HSP in male infertility.【Key words】heat shock protein; male infertility; Spermatozoa熱休克蛋白（heat shock protein, HSP）是指所有生物細胞在熱度、病原體、細胞因子及理化生物等應激原刺激后，發(fā)生熱休克反應（heat shock response, HSR）激活HSP基因時產(chǎn)生的一類伴隨細胞內(nèi)功能性蛋白的伴侶蛋白分子。HSP的命名最早來源于HSR。Ritossa等[1]于1962年最早報道了HSR，他將培養(yǎng)黑腹果蠅幼蟲的溫度從25℃提高至30℃，30min后發(fā)現(xiàn)其唾液腺染色體的某一區(qū)域出現(xiàn)蓬松現(xiàn)象（“膨突”），提示該區(qū)域基因轉(zhuǎn)錄增強。隨后，Tissieres等[2]研究發(fā)現(xiàn)此現(xiàn)象的產(chǎn)生是由于飼養(yǎng)溫度升高增強果蠅染色體特定區(qū)域的基因轉(zhuǎn)錄，從而翻譯出相應蛋白質(zhì)，即HSP。進一步研究表明，各種應激環(huán)境（感染、損傷、腫瘤等）均可引起類似反應產(chǎn)生HSP[3]，所以HSP又稱為應激蛋白。男性不育是指夫婦婚后同居一年以上，未用任何避孕措施，由于男方的原因造成女方不孕者。據(jù)統(tǒng)計，全世界不育夫婦約占已婚夫婦的15％，2010年全球不育人群已達8千萬，其中男方因素約占50％[4]。70％以上的男性不育病因不明，在已知病因的男性不育患者中，其發(fā)病機制也尚未完全闡明[5]。近年來，國內(nèi)外學者在細胞和分子水平上做了大量研究，發(fā)現(xiàn)HSP參與許多生物體內(nèi)多種類型的非應激過程，包括精子發(fā)生、精子獲能及受精等一系列活動。因此，探討HSP家族在生殖過程的作用對研究男性生殖，特別對研究男性不育的分子機制具有十分重要的意義。1 HSP概述1.1 HSP分類HSP種類繁多，目前尚無統(tǒng)一的分類標準，但是大多基于蛋白相對分子量大小及同源程度。日本學者森本將主要HSP分為四個家族，HSP9O家族(相對分子量為83～90 000)，HSP70家族(相對分子量為66～78 000)，HSP60以及小相對分子量HSP家族(相對分子量為12～43 000)。Khalil等根據(jù)相對分子量將HSP分為六大類：HSP100，HSP90，HSP70，HSP60，HSP40和小HSP，表1總結了人HSP的分類、定位及特性[6]。此外，也有學者依據(jù)誘導方式將相對分子量34、75、78、94及170 000的HSP又稱為葡萄糖調(diào)節(jié)糖蛋白(glucose-regulated proteins, GRPs)，認為與葡萄糖缺失誘導有關，后來發(fā)現(xiàn)缺氧、鈣濃度等因素均可引起GRPs表達上調(diào)。表1 人熱休克蛋白的分類、定位及特性Table 1 classification, location and function of human HSPsFamilyMembersmolecular weight (kDa)Intracellular locationBiological functionSmall HSPsHSP1010MitochondriaCo-factor for HSP60HSP2722Cytosol NucleusMicrofilament stabilizationAntiapoptoticHSP40/DNAJ FamilyHSP4038CytosolCo-chaperone for HSP70DNAJA/B/C16～44Cytosol Nucleus MitochondriaPromotes reactions in protein metabolism, tumor suppressor, transmembrane cochaperone HSP60HSP6061Mitochondriarefolds proteins and prevents aggregation of denatured proteins, proapoptoticCCT1～757～60Cytosol NucleusMolecular chaperone: assists the folding of proteins upon ATP hydrolysisHSP70HSP7070CytosolAssists folding of some newly translated proteins, disassembling oligomeric proteins structuresHSP70-270Cell surfaceConstitutively expressed at high levels in brain and testis, molecular chaperoneHSP72/HSP73（HSC70）70CytosolStress inducible, stimulates dephosphorylation of stress kinase JNK in heat-shocked cells and protects them from apoptosis Grp75/7873/72Mitochondria /Endoplasmic reticulumCooperates with HSP60 to fold preproteins following transit across mitochondrial membrane/antiapoptotic, anti-inflammatoryHSP90HSP90A/B86/84CytosolInducible in stress conditions, ATPase activity, cell cycle regulationGrp94/TRAP192/75Cytosol /Endoplasmic reticulum MitochondriaAntiapoptotic, chaperone, cell cycle regulation, ATPase activity1.2 HSP生物學作用HSP的基本功能是幫助蛋白質(zhì)的正確折疊、維持、移位和降解。HSP可以同具有不同功能的多種蛋白質(zhì)在細胞中形成復合體,并通過其形成或解離而參與有關蛋白質(zhì)的折疊、亞基的組裝、細胞內(nèi)運輸及蛋白質(zhì)降解等過程，以調(diào)節(jié)靶細胞的活性和功能，但不參與靶蛋白的組成。此外，HSP還具有協(xié)同免疫作用，包括參與抗原加工呈遞、淋巴細胞歸巢、輔助免疫球蛋白的裝配和腫瘤免疫等。2 HSP與男性不育精子發(fā)生是一個獨特而且復雜的細胞分化過程，從精原細胞增殖分化開始到形成成熟精子，包括三個階段，即精原細胞有絲分裂、精母細胞減數(shù)分裂、減數(shù)分裂后精子細胞的分化及精子成熟。此過程與HSP密切相關，精子發(fā)生中任何應激均可誘導機體HSP合成增加，使機體迅速適應環(huán)境的變化，對維持生精細胞的生存和內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定起著重要作用。2.1 HSP70家族HSP70家族是一類最保守、研究最深入的HSP家族。Boulanger等[7]于1995年發(fā)現(xiàn)HSP70能與導致不育的支原體共同識別硫糖脂基團，而后者在體外可阻止精卵結合，可能與支原體感染性不育癥有關。但也有報道稱在男性不育癥中，HSP70表達上調(diào)可以對精子凋亡起到保護作用[8]。HSP70在精子獲能和發(fā)生頂體反應后定位會發(fā)生改變。在豬精子中，HSP70分布于赤道段三角型區(qū)域，獲能后重新分布在亞赤道帶及赤道段的區(qū)域，并向質(zhì)膜的外側易位。HSP70在獲能和頂體反應過程中定位的動態(tài)變化，提示其可能參與配子間的相互作用。HSP70-2（HSPA2）是一種聯(lián)會復合體結合蛋白，特異性表達于男性生殖細胞分化的特定時期。HSP70-2在精原細胞中無表達，但在精母細胞細線期和偶線期可以檢測到。HSP70-2高表達于精母細胞粗線期，能與聯(lián)會復合體的側面結構結合。有學者研究結果[9]顯示：HSP70-2在正常人、精子成熟停滯患者的睪丸組織和精子均有表達，且在后者HSP70-2表達明顯較正常人低；而在唯支持細胞綜合征中則無表達。在精索靜脈曲張[10]、少精子癥[11]及弱精子癥[12]患者中，HSP70-2表達也明顯降低，而且缺乏Bat3還可以加速HSP70-2下調(diào)[13]。另一方面，敲除HSP70-2基因的小鼠精子發(fā)育停滯在減數(shù)分裂Ⅰ期，大多數(shù)新產(chǎn)生的粗線期精母細胞發(fā)生凋亡，小鼠出現(xiàn)不育[14]。因此HSP70-2在精子分化成熟中起關鍵作用，其缺失或失活可能會導致男性不育。此外，Govin等[15]報道HSP70-2還與精子DNA裝配的蛋白（裝配蛋白1和2）有關，表明其參與DNA聚集結構的組裝。Grp78也稱免疫球蛋白結合蛋白（immunoglobulin-binding protein, BiP)屬于HSP70家族成員之一。許多研究已經(jīng)證實Grp78在人和小鼠睪丸及附睪中精子發(fā)生時期的表達[16,17]，其主要分布在精母細胞和精子細胞核周圍的胞質(zhì)內(nèi)。Grp78在精子發(fā)生中的階段性表達也提示其可能與精子有絲分裂和減數(shù)分裂活性相關。睪丸產(chǎn)生的精子尚不成熟，無受精和運動能力，而Grp78可能參與精子在附睪內(nèi)的成熟過程[18]。進一步研究發(fā)現(xiàn)Grp78在人排出的成熟精子中也有表達，表明其還與精子受精能力的獲得密切相關，但不直接涉及調(diào)控精子運動[16]。此外，輸卵管上皮細胞分泌并表達Grp78，后者與配子結合調(diào)節(jié)精子透明帶結合[19]。2.2 HSP90家族Miller等[20]于1992年實驗證實HSP90在人精子中的表達，并指出發(fā)生頂體反應后HSP90定位由精子頸部和尾部轉(zhuǎn)變到精子核周圍的赤道部。隨后，Yue等[21]發(fā)現(xiàn)HSP90同源蛋白（HSP83）發(fā)生基因突變會出現(xiàn)不育，電鏡顯示突變導致精子發(fā)生不同階段的微管蛋白均出現(xiàn)改變，提示HSP90除了直接參與微管的裝配，還在調(diào)控精子微管信號通路起重要作用[21]。2.3 HSP60家族HSP60在大鼠精原細胞、初級精母細胞和支持細胞[22]，以及人睪丸組織中均可檢測到表達[23]。精子獲能觸發(fā)構象改變時，HSP60磷酸化可易化功能性透明帶受體復合體在精子表面的形成，促進精卵結合[24]。在精子發(fā)生中，精原細胞有絲分裂活性與HSP60表達量有明顯相關性，有絲分裂時HSP60表達明顯上調(diào)[22,25]。精原細胞內(nèi)HSP60在男性不育患者睪丸中表達下調(diào)，且表達越低，生精功能越差，可能與HSP60可以對精原細胞起到保護作用有關。有研究稱HSP60還可能影響精子細胞內(nèi)信號傳導和精子獲能[26]，同時HSP60引起的免疫應答還可能在男性生殖道衣原體感染中起重要作用，進而參與了男性不育的發(fā)生[27]。Martinez-Prado等[28]檢測了80例無癥狀男性生殖道感染的精液，發(fā)現(xiàn)抗HSP60抗體和抗精子抗體的出現(xiàn)與慢性男性生殖道感染有關，也有研究證實抗HSP60抗體在輸卵管不育患者中低度明顯增高[29]。2.4 其他HSP家族Adly等[30]檢測30例人睪丸組織中HSP27的表達發(fā)現(xiàn)，在精子發(fā)生的不同階段，其表達不同。在精子成熟停滯的睪丸組織中，HSP27在支持細胞中表達上調(diào)，精原細胞和精母細胞中表達下調(diào)，精子和間質(zhì)細胞無表達；在唯支持細胞綜合征中，HSP27在支持細胞表達上調(diào)，間質(zhì)細胞無表達。因此，Adly等認為睪丸組織中HSP27的表達變化提示精子生成異?？赡芘c男性不育的發(fā)病機制有關。也有學者報道HSP27在弱精子癥精子中表達明顯降低[31]。以上研究均表明HSP27可能參與精子發(fā)生，但具體機制仍需要進一步的研究。HSP10在獲能精子頭部有表達，但在頂體反應后消失，提示其可能與精子-透明區(qū)相互作用有關[32,33]。有研究還證實HSP10在睪丸中低表達可能參與睪丸內(nèi)細胞的凋亡[34]。DNAJB13在精子鞭毛發(fā)育的軸絲裝配和穩(wěn)定中發(fā)揮作用[35]，進一步研究表明DNAJB13與SEPT4直接作用將環(huán)狀結構裝配并定位于精子主段與中段連接處[36]。3 總結目前越來越多的研究顯示HSP與男性不育關系密切。HSP既直接參與了精子發(fā)生、精子分化成熟，還在精子頂體反應、精子獲能及精卵結合等過程中扮演重要角色。因此，對HSP作用機制的進一步研究有助于深入了解男性不育的發(fā)病機制，可能為男性不育提供新的治療途徑。同時，HSP家族成員較多，不同成員也存在獨有的作用方式，各種HSP作用的具體機制仍需要進一步探討。參考文獻[1] Ritossa F.A new puffing pattern induced by temperature shock and DNP in Drosophila[J].Cellular and Molecular Life Sciences,1962,18 (12):571-573.[2] Tissieres A, Mitchell HK,Tracy UM.Protein synthesis in salivary glands of Drosophila melanogaster: relation to chromosome puffs[J].J Mol Biol,1974,84 (3):389-398.[3] Whitesell L,Lindquist SL.HSP90 and the chaperoning of cancer[J].Nat Rev Cancer,2005,5 (10):761-772.[4] Sharlip ID, Jarow JP, Belker AM, et al.Best practice policies for male infertility[J].Fertil Steril,2002,77 (5):873-882.[5] 王益鑫,鄭菊芬.男性不育研究新進展[J].中華男科學雜志,2006,12 (9):4.[6] Khalil AA, Kabapy NF, Deraz SF, et al.Heat shock proteins in oncology: Diagnostic biomarkers or therapeutic targets?[J].Biochim Biophys Acta,2011,1816 (2):89-104.[7] Boulanger J, Faulds D, Eddy EM, et al.Members of the 70 kDa heat shock protein family specifically recognize sulfoglycolipids: role in gamete recognition and mycoplasma-related infertility[J].J Cell Physiol,1995,165 (1):7-17.[8] Erata GO, Kocak Toker N, Durlanik O, et al.The role of heat shock protein 70 (Hsp 70) in male infertility: is it a line of defense against sperm DNA fragmentation?[J].Fertil Steril,2008,90 (2):322-327.[9] Feng HL, Sandlow JI,Sparks AE.Decreased expression of the heat shock protein hsp70-2 is associated with the pathogenesis of male infertility[J].Fertil Steril,2001,76 (6):1136-1139.[10] Lima SB, Cenedeze MA, Bertolla RP, et al.Expression of the HSPA2 gene in ejaculated spermatozoa from adolescents with and without varicocele[J].Fertil Steril,2006,86 (6):1659-1663.[11] Lima S, Cedenho Sr A, Hassun Sr P, et al.Varicocele × heat stress: Expression of the heat shock protein 70–2 (HSP70–2) in the sperm cells[J].Fertility and Sterility,2004,82, Supplement 2 (0):S181.[12] Cedenho AP, Lima SB, Cenedeze MA, et al.Oligozoospermia and heat-shock protein expression in ejaculated spermatozoa[J].Hum Reprod,2006,21 (7):1791-1794.[13] Sasaki T, Marcon E, Mcquire T, et al.Bat3 deficiency accelerates the degradation of Hsp70-2/HspA2 during spermatogenesis[J].J Cell Biol,2008,182 (3):449-458.[14] Dix DJ, Allen JW, Collins BW, et al.Targeted gene disruption of Hsp70-2 results in failed meiosis, germ cell apoptosis, and male infertility[J].Proc Natl Acad Sci U S A,1996,93 (8):3264-3268.[15] Govin J, Caron C, Escoffier E, et al.Post-meiotic shifts in HSPA2/HSP70.2 chaperone activity during mouse spermatogenesis[J].J Biol Chem,2006,281 (49):37888-37892.[16] Lachance C, Fortier M, Thimon V, et al.Localization of Hsp60 and Grp78 in the human testis, epididymis and mature spermatozoa[J].Int J Androl,2010,33 (1):33-44.[17] Huo R, Zhu YF, Ma X, et al.Differential expression of glucose-regulated protein 78 during spermatogenesis[J].Cell Tissue Res,2004,316 (3):359-367.[18] Kameshwari DB, Bhande S, Sundaram CS, et al.Glucose-regulated protein precursor (GRP78) and tumor rejection antigen (GP96) are unique to hamster caput epididymal spermatozoa[J].Asian J Androl,2010,12 (3):344-355.[19] Marin-Briggiler CI, Gonzalez-Echeverria MF, Munuce MJ, et al.Glucose-regulated protein 78 (Grp78/BiP) is secreted by human oviduct epithelial cells and the recombinant protein modulates sperm-zona pellucida binding[J].Fertil Steril,2010,93 (5):1574-1584.[20] Miller D, Brough S,Al-Harbi O.Characterization and cellular distribution of human spermatozoal heat shock proteins[J].Hum Reprod,1992,7 (5):637-645.[21] Yue L, Karr TL, Nathan DF, et al.Genetic analysis of viable Hsp90 alleles reveals a critical role in Drosophila spermatogenesis[J].Genetics,1999,151 (3):1065-1079.[22] Meinhardt A, Parvinen M, Bacher M, et al.Expression of mitochondrial heat shock protein 60 in distinct cell types and defined stages of rat seminiferous epithelium[J].Biol Reprod,1995,52 (4):798-807.[23] Werner A, Meinhardt A, Seitz J, et al.Distribution of heat-shock protein 60 immunoreactivity in testes of infertile men[J].Cell Tissue Res,1997,288 (3):539-544.[24] Asquith KL, Baleato RM, Mclaughlin EA, et al.Tyrosine phosphorylation activates surface chaperones facilitating sperm-zona recognition[J].J Cell Sci,2004,117 (Pt 16):3645-3657.[25] Wu Y, Pei Y,Qin Y.Developmental expression of heat shock proteins 60, 70, 90, and A2 in rabbit testis[J].Cell Tissue Res,2011,344 (2):355-363.[26] Lachance C, Bailey JL,Leclerc P.Expression of Hsp60 and Grp78 in the human endometrium and oviduct, and their effect on sperm functions[J].Hum Reprod,2007,22 (10):2606-2614.[27] Cappello F, Conway de Macario E, Di Felice V, et al.Chlamydia trachomatis infection and anti-Hsp60 immunity: the two sides of the coin. PLoS Pathog 2009, 5(8):e1000552.[28] Martinez-Prado E, Camejo Bermudez MI.Expression of IL-6, IL-8, TNF-alpha, IL-10, HSP-60, anti-HSP-60 antibodies, and anti-sperm antibodies, in semen of men with leukocytes and/or bacteria. Am J Reprod Immunol 2010, 63(3):233-243.[29] Rodgers AK, Wang J, Zhang Y, et al.Association of tubal factor infertility with elevated antibodies to Chlamydia trachomatis caseinolytic protease P. Am J Obstet Gynecol 2010, 203(5):494 e497-494 e414.[30] Adly MA, Assaf HA,Hussein MR.Heat shock protein 27 expression in the human testis showing normal and abnormal spermatogenesis[J].Cell Biol Int,2008,32 (10):1247-1255.[31] Huo R, He Y, Zhao C, et al.Identification of human spermatogenesis-related proteins by comparative proteomic analysis: a preliminary study[J].Fertil Steril,2008,90 (4):1109-1118.[32] Walsh A, Whelan D, Bielanowicz A, et al.Identification of the molecular chaperone, heat shock protein 1 (chaperonin 10), in the reproductive tract and in capacitating spermatozoa in the male mouse[J].Biol Reprod,2008,78 (6):983-993.[33] Jia H, Halilou AI, Hu L, et al.Heat shock protein 10 (Hsp10) in immune-related diseases: one coin, two sides[J].Int J Biochem Mol Biol,2011,2 (1):47-57.[34] He Y, Shang X, Sun J, et al.Gonadal apoptosis during sex reversal of the rice field eel: implications for an evolutionarily conserved role of the molecular chaperone heat shock protein 10[J].J Exp Zool B Mol Dev Evol,2010,314 (4):257-266.[35] Guan J,Yuan L.A heat-shock protein 40, DNAJB13, is an axoneme-associated component in mouse spermatozoa[J].Mol Reprod Dev,2008,75 (9):1379-1386.[36] Guan J, Kinoshita M,Yuan L.Spatiotemporal association of DNAJB13 with the annulus during mouse sperm flagellum development[J].BMC Dev Biol,2009,9 23.